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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：血漿游離血紅蛋白測(cè)定
更新時(shí)間：2013-12-05 瀏覽次數(shù)：1256
實(shí)驗(yàn)原理
血紅蛋白具有類過(guò)氧化物酶活性，可催化H2O2釋放新生態(tài)氧，使鄰甲聯(lián)苯胺氧化發(fā)生顏色變化，由無(wú)色zui終變?yōu)樗{(lán)紫色。根據(jù)顯色深淺與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，可測(cè)出其含量。
實(shí)驗(yàn)方法
材料：
1．2g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
2．1%H2O2
3．10%醋酸溶液
4．分光光度計(jì)
方法：
1.抽取靜脈血2-3ml，枸櫞酸鈉抗凝，離心分離血漿。
2．按下表進(jìn)行操作，用分光光度計(jì)，波長(zhǎng)為530nm，以空白管調(diào)零，測(cè)定測(cè)定管的吸光度。
3.計(jì)算公式
試劑 （ml） | 測(cè)定管 | 空白管 |
2 g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液 | 0.5 | 0.5 |
患者血漿 | 0.02 | / |
1% H2O2 | 0.5 | 0.5 |
混勻后室溫放置10min | ||
10%醋酸溶液 | 5.0 | 5.0 |
室溫放置10min | ||
3.計(jì)算公式
血漿游離Hb（mg/L）=測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×100
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
參考范圍：0-40mg/L
注意事項(xiàng)
1.一切容器避免血紅蛋白污染；
2.采血要順利，器皿要干燥，檢測(cè)血漿要新鮮，及時(shí)分離，防止人為溶血；
3.鄰聯(lián)苯胺溶液具致癌性，檢測(cè)時(shí)要小心，廢液要妥善處理，以免污染；
4.雙氧水要新鮮配置，濃度要準(zhǔn)確。